1、1. 切片常規(guī)脫蠟至水。

2、如需抗原修復(fù)，可在此步后進(jìn)行2.緩沖液洗 3min/2 次。

3、3. 為了降低內(nèi)源性過氧化物酶造成的非特異性背景染色，將切片放在 Hydrogen Peroxide Block 中孵育 10-15 分鐘。

【資料圖】

4、4. 緩沖液洗 5min/2 次。

5、5. 滴加 Ultra V Block ， 在室溫下孵育 5 分鐘以封閉非特異性的背景染色。

6、(注:孵育不要超過 10 分鐘，否則會(huì)導(dǎo)致特異性染色降低。

7、如果一抗的稀釋液中含有 5 - 10% 正常羊血清，這一步可以省略。

8、)6. 緩沖液洗 5min/2 次。

9、7. 滴加一抗工作液 37 ℃孵育1 - 2 小時(shí)。

10、(具體孵育時(shí)間和溫度由試驗(yàn)者最終決定)8. 緩沖液洗 5min/2 次。

11、9 . 滴加 Primary Antibody Enhancer(增強(qiáng)子)，在室溫下孵育 20 分鐘。

12、10 .緩沖液洗 5min/2 次。

13、11 .滴加 HRP Polymer(酶標(biāo)二抗) ，在室溫下孵育 30 分鐘。

14、(注:HRP Polymer 對(duì)光敏感，應(yīng)避免不必要的光暴露并儲(chǔ)存在不透明的小瓶中。

15、)12 .緩沖液洗 5min/2 次。

16、13 .向 1ml DAB Plus Substrate (或 AEC Plus Substrate) 中滴加 1-2 滴 DAB Plus Chromogen (或 AEC Plus Chromogen)，混勻后滴加到切片上，孵育 3 - 15 分鐘。

17、(具體時(shí)間由染色深淺決定。

18、)14 .自來水充分沖洗，復(fù)染，脫水，透明，封片。

19、簡(jiǎn)介：免疫組化，是應(yīng)用免疫學(xué)基本原理--抗原抗體反應(yīng)，即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì))，對(duì)其進(jìn)行定位、定性及相對(duì)定量的研究，稱為免疫組織化學(xué)技術(shù)(immunohistochemistry)或免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)(immunocytochemistry)。

20、基本原理：抗體和抗原之間的結(jié)合具有高度的特異性，免疫組織化學(xué)正是利用了這一原理。

21、先將組織或細(xì)胞中的某種化學(xué)物質(zhì)提取出來，以此作為抗原或半抗原，通過免疫動(dòng)物后獲得特異性的抗體，再以此抗體去探測(cè)組織或細(xì)胞中的同類的抗原物質(zhì)。

22、由于抗原與抗體的復(fù)合物是無色的，因此還必須借助于組織化學(xué)的方法將抗原抗體結(jié)合的部位顯示出來，以其達(dá)到對(duì)組織或細(xì)胞中的未知抗原進(jìn)行定性，定位或定量的研究。

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